RNA在細(xì)胞內(nèi)極易降解，樣本選擇時(shí)一定要選取新鮮的樣本組織或者取樣后迅速低溫處理（液氮速凍）；樣本出現(xiàn)多次反復(fù)凍融后，RNA得率會(huì)嚴(yán)重下降，也會(huì)導(dǎo)致RNA降解；RNA提取環(huán)境要保持無(wú)RNA酶污染；

二：（RNA)如何處理含有微量EDTA的Buffer EB在（RNA）試劑盒中？

試劑盒中Buffer EB（RNA專(zhuān)用）中含有少量EDTA，可能影響下游實(shí)驗(yàn)，使用時(shí)適當(dāng)稀釋?zhuān)绻闷渌疵撘合疵?，要確保PH>7.5，PH過(guò)低影響洗脫效率；

三：(RNA)離心柱漂洗完成后操作注意事項(xiàng)

離心柱漂洗完成后，盡可能烘干柱膜上殘留乙醇，殘留乙醇會(huì)影響洗脫效率和下游實(shí)驗(yàn)效果；柱膜也不建議過(guò)度干燥，沒(méi)有乙醇味道殘留最好，如果過(guò)度干燥可能影響RNA溶解；如果A260/230值過(guò)低，說(shuō)明樣本提取過(guò)程中漂洗不徹底，有鹽離子殘留，建議增加漂洗次數(shù)；

四：RNA提取中A260/280比值分析：低于1.9的情況說(shuō)明什么？

對(duì)于RNA提取，A260/280<1.9說(shuō)明有可能存在DNA污染或者蛋白污染，如果洗脫樣本時(shí)沒(méi)有使用Buffer EB，而使用ddH20（確保無(wú)RNA酶），比值或偏低，因?yàn)?/strong>Ph值會(huì)影響吸光值，并不表示樣本純度低；

五：如何判斷RNA的完整性

RNA完整性可以通過(guò)超微量核酸檢測(cè)儀檢測(cè)或者瓊脂糖凝膠電泳（電泳條件：膠濃度1%；1XTAE電泳緩沖液）來(lái)判斷；一般樣本RNA電泳條帶為兩條帶，對(duì)于植物樣本，有可能存在葉綠體RNA干擾，條帶數(shù)量大于4條，并不表示RNA提取發(fā)生降解；

六：如何有效防止RNA污染？

RNA容易受到環(huán)境污染導(dǎo)致RNA嚴(yán)重降解，建議實(shí)驗(yàn)過(guò)程中注意更換實(shí)驗(yàn)手套，使用所有耗材應(yīng)該均無(wú)RNA酶的一次性耗材；
電泳環(huán)境受到RNA酶污染，也會(huì)造成RNA降解，電泳檢測(cè)不準(zhǔn)確，確保電泳過(guò)程中電泳緩沖液，上樣緩沖液無(wú)RNA酶污染；

七：植物RNA樣本處理量差異的處理方案

對(duì)于植物樣本，樣本處理量無(wú)法統(tǒng)一確定，對(duì)于一般樣本（煙草，擬南芥等），提取量不超過(guò)100mg鮮重組織或者20mg干重組織，對(duì)于復(fù)雜樣本（水稻，玉米，榆樹(shù)等），建議初始樣本量不超過(guò)50mg鮮重或者10mg干重組織；如果需要較高的RNA量，可以采取多管濃縮的方法提取RNA;
如果離心時(shí)堵塞離心柱，建議減少初始樣本量；

八：植物RNA樣本提取試劑盒選型指南

RNA提取一般是傳統(tǒng)TRIzol方法和改進(jìn)的柱式方法；對(duì)于TRIzol法進(jìn)本可以提取大部分樣本RNA，但是對(duì)于多糖多酚植物樣本，建議使用者盡量選擇具有針對(duì)性的試劑盒（參見(jiàn)目錄），傳統(tǒng)TRIzol法無(wú)法有效去除多糖多酚這些次生代謝物；

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